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共培養(yǎng)遷移實驗|周細(xì)胞與肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)遷移試驗

更新時間:2022-09-02   更新時間:2022-09-02   點(diǎn)擊次數(shù):1403次

  應(yīng)用Ibidi傷口愈合插件進(jìn)行共培養(yǎng)“傷口愈合"實驗,對周細(xì)胞與肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞做共培養(yǎng)遷移試驗。

  

微信圖片_20220829105319.jpg

 

  實驗步驟:

  

  1)鋪細(xì)胞(圖二)  

  將ibidi傷口愈合培養(yǎng)皿底部的保護(hù)膠帶撕除。在ibidi細(xì)胞插件的每孔中分別加入1.5 ×104的PMVECs和Pericyte的細(xì)胞懸液。注意不要大力晃動培養(yǎng)皿。以防止細(xì)胞不均勻。在37℃培養(yǎng)箱中孵育  

  

微信圖片_20220829105315.png 

  圖二,ibidi傷口愈合插件中加入細(xì)胞

  

  2)形成“劃痕"  

  采用無血清培養(yǎng)基饑餓細(xì)胞16小時。如圖四所示,小心的用鑷子夾住插件的一個角,將插件移除?! ?/p>

  

微信圖片_20220829105312.png

  圖三,移除插件

  

  移除插件后,要用顯微鏡檢查是否形成合格的“劃痕"?! ?/p>

  小心的清洗細(xì)胞,之后加入2ml培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)(圖四)  

  

微信圖片_20220829105308.png

  

  采集并分析圖像:  

  在顯微鏡下選取能同時看到“劃痕"和兩邊細(xì)胞的視野進(jìn)行成像,“劃痕"的方向最好是水平或者垂直?! ?/p>

  采集0h和6h的圖像,觀測細(xì)胞的遷移率和細(xì)胞遷移方向,用中性粒周蛋白定位微管生長中心(MTOC)并用鬼筆環(huán)肽標(biāo)記F-actin  

  

微信圖片_20220829105300.jpg


  由圖可見,相對于左側(cè)的對照,右邊的PAH來源的Pericytes遷移距離較短,并且從熒光標(biāo)記圖上可見,紅色箭頭表示遷移的方向,PAH組無特定方向,不受PMVEC的影響。柱狀圖為統(tǒng)計結(jié)果。

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